發(fā)酵過程中,細(xì)胞濃度是一個非常重要的生理參數(shù),不但可以計算比生長速率,底物消耗速率、生物量產(chǎn)率和維持系數(shù)等參數(shù),還可以及時判斷是否有染菌等異常情況發(fā)生。目前測量細(xì)胞濃度的方法主要有化學(xué)法(DNA/RNA分析)和物理法(干重、光密度、呼吸商等)兩大類。一般來說,與物理法相比,化學(xué)法能較準(zhǔn)確的測量有代謝活性的生物量,缺點是花費時間長,而利用物理法測量,無法區(qū)分處于懸浮狀態(tài)的顆粒和微生物,也無法分別活死細(xì)胞。
實現(xiàn)在線活細(xì)胞濃度監(jiān)測一直是發(fā)酵領(lǐng)域的熱門話題,僅些年來出現(xiàn)了不少的測量方法,依據(jù)的工作原理也是五花八門,其中代表性的有聲學(xué),激光散色、熒光、核磁、量熱或電容。其中法國fogale公司的測量儀器,以電容法為工作原理,直接將傳感器安裝與發(fā)酵罐上,可承受121℃高溫滅菌,理論技術(shù)也比較成熟,是目前zui為理想的適合工業(yè)級別的在線活細(xì)胞傳感器。
工作原理:
電容傳感器采用活細(xì)胞的介電特性,實時連續(xù)測量活細(xì)胞的生物體積,可應(yīng)用于實驗室桌面型的反應(yīng)器或者是工業(yè)規(guī)模的大型反應(yīng)器
兩對對電極位于傳感器的頂部,一對用于在培養(yǎng)基中產(chǎn)生交變的電場,在電場范圍內(nèi),帶有完整細(xì)胞膜的細(xì)胞會在培養(yǎng)基中發(fā)生極化現(xiàn)象,發(fā)生極化的細(xì)胞可以認(rèn)為是極小的電容,死細(xì)胞或者其他粒子沒有完整的細(xì)胞膜,所以不能形成電容型號。另一對電極用于檢測培養(yǎng)基中的介電信號,培養(yǎng)基中的介電信號和細(xì)胞的濃度是關(guān)聯(lián)的。
細(xì)胞的極化率和電場的頻率純在函數(shù)關(guān)系,當(dāng)頻率增加時,培養(yǎng)基中細(xì)胞的介電常數(shù)由低頻峰(zui大極化)降低到高頻峰(zui小極化)。這種隨頻率增加極化率降低的現(xiàn)象稱為β-散射。
傳感器采用雙頻測量模式:培養(yǎng)基的基線在10MHz左右得到,細(xì)胞的信號在臨界頻率區(qū)域獲得,在曲線的拐點,(動物細(xì)胞和細(xì)菌在1MHz,酵母在2MHz)我們獲得了*的信號線性。
應(yīng)用:
這項技術(shù)可廣泛應(yīng)用于各種細(xì)胞培養(yǎng),生物發(fā)酵過程。已被文獻(xiàn)證實可應(yīng)用的細(xì)胞如下:
動物細(xì)胞:CHO, BHK, MDCK, PERC6, NSO, HEK, Hela, Hybridoma, Vero
細(xì) 菌:E.Coli, Bacillus Thuringensis, Salmonella, Streptomyces, Lactic Bacteria
酵 母:Pichia Pastoris, Saccharomyces Cervisiae, Polymorpha Hasenula
昆蟲細(xì)胞:sf9, Hi-5
真 菌:Absidia
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